巨噬細胞清除劑清除定居巨噬細胞骨髓輻照回輸實驗解決方案

巨噬細胞清除劑（如氯膦酸二鈉脂質體，Clodronate Liposomes，貨號CP-005-005，荷蘭Liposoma）用于清除體內特定組織的巨噬細胞后，通過回輸（Adoptive Transfer）修飾或來源特定的巨噬細胞，是研究巨噬細胞功能的經(jīng)典實驗策略。其核心在于精確控制清除與回輸?shù)臅r間窗口，確保原位巨噬細胞被有效清除，而回輸?shù)募毎艽婊畈l(fā)揮功能。

關鍵實驗要素

?清除劑選擇與給藥?

•腹腔注射?：常用于清除腹腔巨噬細胞，典型劑量為200 µL?。

•氣管內給藥 (i.t.)?：用于清除肺泡巨噬細胞，例如在哮喘模型中，常用40 µL/次，連續(xù)給藥2天?。

•尾靜脈注射?：常用于清除肝臟等全身性巨噬細胞，或用于回輸細胞?。

•常用試劑?：荷蘭Liposoma公司生產(chǎn)的氯膦酸二鈉脂質體（貨號CP-005-005）是廣泛使用的成熟試劑，通過巨噬細胞的內吞作用誘導其凋亡?12。

•給藥方式?：根據(jù)目標組織選擇不同的給藥途徑：

?回輸時間點?
回輸時間點是實驗成功的關鍵，需在清除劑效果達到峰值且其藥效基本消退后進行，以避免回輸細胞被二次清除。

?•腹腔清除后?：通常在清除劑注射后?72小時?回輸細胞?。

•肺泡清除后?：在末次清除劑給藥后?24小時?回輸細胞?。

•?肝臟清除后?：清除后約?48小時?進行回輸?。

?回輸細胞質控?

•細胞類型?：可以是骨髓來源的巨噬細胞（BMDMs）、腹腔巨噬細胞（pMacs）或從特定基因敲除小鼠（如CD1d-KO）中分離的細胞?。

•回輸數(shù)量?：根據(jù)實驗模型和給藥途徑調整，例如腹腔回輸常用3×10?個細胞?，肺泡回輸常用5×10?個細胞?2。

•回輸方式?：通常與清除途徑一致，如腹腔注射、氣管內注射或尾靜脈注射?。

核心應用與發(fā)現(xiàn)?
此技術被廣泛應用于探究巨噬細胞在疾病中的作用。例如，有研究利用該技術發(fā)現(xiàn)，缺乏CD1d分子的巨噬細胞會因脂質代謝重編程而對炎癥刺激反應更強，揭示了CD1d在調控巨噬細胞代謝與免疫反應中的關鍵作用?。

?總結?：巨噬細胞清除與回輸是一個精密的兩步實驗流程。成功的關鍵在于?根據(jù)目標組織選擇合適的清除劑給藥方式，并嚴格遵循經(jīng)文獻驗證的、針對該組織的理想回輸時間窗口?（通常為清除后24-72小時），同時確保回輸細胞的數(shù)量、活力和純度。

骨髓嵌合小鼠巨噬細胞回輸模型，可以參考如下nature communications文獻。

用于骨髓嵌合實驗的10–12周齡雌性C57BL/6J小鼠接受9.5?Gy的照射。次日，從供體小鼠體內在無菌條件下分離骨髓并通過靜脈注射給予受體小鼠。在照射后第10天，使用氯膦酸脂質體處理小鼠以清除組織駐留的巨噬細胞。經(jīng)過50天的骨髓重建后，小鼠即可用于實驗。

論文信息：

論文題目：Acid ceramidase of macrophages traps herpes simplex virus in multivesicular bodies and protects from severe disease

期刊名稱：Nature Communications

時間期卷：11, Article number: 1338(2020)

在線時間：2020年3月12日

DOI： doi.org/10.1038/s41467-020-15072-8

產(chǎn)品信息：

貨號：CP-005-005

規(guī)格：5ml+5ml

品牌：Liposoma

產(chǎn)地：荷蘭

名稱：Clodronate Liposomes& Control Liposomes

辦事處：Target Technology(靶點科技)

Clodronate Liposomes氯膦酸鹽脂質體清除病毒模型中巨噬細胞 ，荷蘭Liposoma巨噬細胞清除劑ClodronateLiposomes見刊于Nature Communications：巨噬細胞的酸性神經(jīng)酰胺酶將單純皰疹病毒困在多囊泡體中，并防止嚴重疾病。

Liposoma巨噬細胞清除劑Clodronate Liposomes氯膦酸二鈉脂質體清除腫瘤相關巨噬細胞的材料和方法：

Reagents

D-erythro-sphingosine (C18, 860490) and D-Galactosyl-β1-1’-N-Nervonoyl-D-erythro-sphingosine (C24:1, β-D-Galactosyl Ceramide, 110759), were obtained from Avanti Polar Lipids (Alabaster, AL, USA). Glycoceramidase (E9030-100MUN), sphingomyelinase (S8633-25UN), Cy3-linked DBCO (777366-1?mg) and DAPI (D9542) were purchased from Millipore Sigma (Darmstadt, Germany). Recombinant mouse Asah2 (3558-AH) was purchased from R&D Systems (Minneapolis, MN, USA). The sphingosine kinase inhibitor SKI-II (CAS # 312636-16-1; Cat # 2097) was obtained from Tocris Bioscience (Bristol, United Kingdom) and tamoxifen (CAS # 10540-29-1, Cat # T5648-5G) and cornoil (CAS # 8001-30-7, Cat # C8267-500ML) from Millipore Sigma. Clodronate and control liposomes were purchased from Liposoma (CP-005-005, Amsterdam, Netherlands). Clickable ω-azido-sphingosine ((2S,3R,E)-2-amino-18-azidooctadec-4-ene-1,3-diol) for click chemistry42 staining was synthesized in-house by Julian Fink.

Depletion of macrophages

For macrophage-depleted mouse experiments, mice were treated intravenously with 50?mg/kg clodronate to deplete tissue resident macrophages. After 3 days, mice were ready to be used in experiments.

材料和方法文獻截圖：